都是革兰氏阴性杆菌，如何区分大肠、肺克、阴沟？
大肠杆菌（Escherichia coli）、肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）、阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）均为革兰氏阴性杆菌，同属肠杆菌科（Enterobacteriaceae），在显微镜下形态相似（短杆状、无芽孢、可有鞭毛），仅凭染色和形态无法区分。食品检验员或临床微生物人员需通过生化特性、培养特征、快速试剂和仪器鉴定等方法进行鉴别。
以下是实用、可操作的区分方法，避免复杂公式，突出实际应用。
一、观察菌落形态（初步判断）
在常规培养基上的生长特征可提供第一线索：
大肠杆菌：
在血平板上：灰白色、湿润、圆形、边缘整齐的菌落，多数菌株有β-溶血（浅绿色溶血环）。
在麦康凯平板上：发酵乳糖，形成粉红色菌落（这是关键特征）。
在EMB平板上：呈紫黑色、有金属光泽（典型特征）。
肺炎克雷伯菌：
菌落黏稠、拉丝，用接种环挑取时呈“拉丝状”（重要特征）。
在麦康凯上：粉红色菌落（也发酵乳糖）。
常见于痰液、呼吸道样本，食品中相对较少。
阴沟肠杆菌：
在血平板上：灰白色、湿润、非溶血或弱溶血。
在麦康凯上：粉红色菌落（发酵乳糖）。
与大肠杆菌相似，但不产生金属光泽，菌落较不黏稠。
✅ 初步提示：
粉红菌落 + 金属光泽 → 大肠杆菌
粉红菌落 + 拉丝 → 肺炎克雷伯菌
粉红菌落 + 无光泽、不拉丝 → 可能为阴沟肠杆菌
二、生化试验快速区分
通过简单生化反应可有效鉴别，常用商品化微量生化鉴定管或鉴定试条（如API 20E、科玛嘉试剂条）。
1. 靛基质试验（Indole Test）
大肠杆菌：阳性（+）→ 加试剂后变红色（“玫瑰红”）
肺炎克雷伯菌：阴性（–）
阴沟肠杆菌：阴性（–）
✅ 快速区分大肠杆菌与其他两者。
2. 甲基红试验（MR Test）
大肠杆菌：阳性（+）→ 变红色
肺炎克雷伯菌：阴性（–）→ 不变色或黄色
阴沟肠杆菌：阴性（–）
3. VP试验（Voges-Proskauer）
大肠杆菌：阴性（–）
肺炎克雷伯菌：阳性（+）→ 变红色
阴沟肠杆菌：阳性（+）→ 变红色
✅ MR和VP常联合使用（MR-VP试验）：
MR+/VP– → 大肠杆菌
MR–/VP+ → 肺炎克雷伯菌或阴沟肠杆菌
4. 枸橼酸盐利用试验（Citrate Test）
大肠杆菌：阴性（–）→ 斜面不变色（绿色）
肺炎克雷伯菌：阳性（+）→ 斜面变蓝
阴沟肠杆菌：阳性（+）→ 变蓝
✅ 区分大肠杆菌（–）与克雷伯菌、肠杆菌（+）
5. 鸟氨酸脱羧酶试验
大肠杆菌：阳性（+）
肺炎克雷伯菌：阴性（–）
阴沟肠杆菌：阳性（+）
✅ 可辅助区分肺炎克雷伯菌（–）与阴沟肠杆菌（+）
三、快速商品化试剂盒
基层实验室可使用以下工具：
肠杆菌科鉴定试条（如API 20E）：
包含多种生化孔，接种后培养18–24小时，查编码本得出结果。
操作简单，准确率高。
显色培养基：
大肠杆菌：蓝色或蓝绿色菌落
肺炎克雷伯菌：粉色或紫色菌落
阴沟肠杆菌：粉色但形态不同
如科玛嘉（CHROMagar™）大肠杆菌/克雷伯菌区分培养基：
可在24小时内初步区分。
四、自动化鉴定系统（高级实验室）
全自动微生物鉴定仪（如VITEK 2、BD Phoenix）：
将纯菌落悬液加入鉴定卡，仪器自动读取生化反应。
6–12小时出具种属鉴定结果。
质谱分析（MALDI-TOF MS）：
通过菌体蛋白指纹图谱快速鉴定到种，准确率极高，5分钟出结果。
适用于大型检测机构。
五、总结：快速区分流程（实用口诀）
第一步：看麦康凯——粉红菌落？是 → 进入乳糖发酵菌组
第二步：闻气味——大肠杆菌常有“粪臭味”，克雷伯菌有“果香味”
第三步：做靛基质——阳性 → 大肠杆菌
阴性 → 看VP
第四步：做VP试验——阳性 → 再看枸橼酸盐
阴性 → 可能是其他
第五步：枸橼酸盐阳性 → 肺炎克雷伯菌 或 阴沟肠杆菌
结合拉丝现象：拉丝 → 肺炎克雷伯菌
不拉丝 → 阴沟肠杆菌
六、食品检验中的特别提示
大肠杆菌：常见于粪便污染食品，是卫生指示菌之一，致病型（如O157）需特别关注。
肺炎克雷伯菌：多见于医院环境，食品中较少，但可在潮湿环境（如豆芽、饮用水）中滋生。
阴沟肠杆菌：常见于土壤、水体，可在食品加工设备中形成生物膜，耐消毒剂，是潜在污染源。
结论
虽然三者均为革兰氏阴性杆菌且发酵乳糖，但通过菌落特征 + 靛基质 + VP + 枸橼酸盐等简单生化试验，即可有效区分。食品检验员应掌握这些基础技能，结合商品化鉴定工具，准确识别污染菌种，为溯源和风险控制提供科学依据。对于疑难菌株，建议送至具备资质的实验室进行分子生物学或质谱鉴定。
