在微生物实验和食品检验中，OD600（Optical Density at 600 nm）是测定细菌浓度最常用的方法。所谓“OD600”，是指用波长为600纳米的光穿过细菌悬液时，测量其吸光度（或称光密度），从而间接反映菌液中细菌的数量。

那么，为什么偏偏选择 600 nm 这个波长？而不是其他如400 nm、500 nm 或 700 nm？以下是通俗易懂的解释：

一、避免色素干扰 —— 多数细菌没有强吸收

细菌细胞本身不含强烈的天然色素（如叶绿素、血红蛋白等），它们对可见光的吸收较弱。

在 600 nm 这个波长下，大多数细菌的细胞成分（如蛋白质、核酸）不会强烈吸收光线，因此测得的“吸光度”主要不是由于染料或色素的化学吸收，而是由物理散射引起的。

如果选用更短波长（如260 nm或280 nm），虽然可以检测DNA或蛋白质含量，但会受到培养基中杂质、抗生素、血清等成分的严重干扰，不适合直接测活菌浓度。

✅ 所以选600 nm是为了“避开”分子吸收峰，专注于细胞本身的物理存在。

二、以“光散射”反映细胞数量

OD600 实际上主要测量的是光的散射（light scattering），而不是吸收。

当光通过含有细菌的液体时，细菌颗粒会使光线发生偏转（即散射），导致透过的光减少，仪器记录为“吸光度升高”。

细菌越多 → 颗粒越多 → 散射越强 → OD值越高。

在一定范围内（通常 OD600 < 0.8），OD值与细菌浓度呈良好的线性关系，可用于估算菌量。

✅ 因此，OD600 是一种简单、非破坏性的“浊度法”来估计菌液浓度。

三、600 nm 是“安全窗口”——兼顾灵敏度与兼容性

太短的波长（<500 nm）：容易被培养基中的有色物质（如酵母提取物、血液、指示剂）吸收，背景干扰大。

太长的波长（>700 nm）：散射效应减弱，灵敏度下降，小浓度变化难以检测。

600 nm 正好处于一个“黄金区间”：

能有效检测到细菌引起的散射；

不会被大多数培养基颜色显著干扰（比如LB培养基微黄，影响较小）；

分光光度计普遍配备该波长光源，设备通用性强。

四、历史习惯与标准化

自20世纪中期以来，OD600 就被广泛用于大肠杆菌等模式菌的研究。

大量文献、生长曲线、标准操作规程（SOP）都基于 OD600 建立。

比如：“当 OD600 = 0.6 时进行诱导表达”已成为分子生物学中的通用语言。

这种标准化使得不同实验室之间的数据可比性强。

五、注意事项（不能盲目依赖）

尽管 OD600 使用方便，但也有一些局限：

只适用于浑浊的悬浮液：如果菌体聚团、沉淀或形成生物膜，结果不准。

需稀释至线性范围：OD600 > 1.0 时可能超出仪器线性响应，应稀释后测量。

不同菌种差异大：

大肠杆菌：OD600 ≈ 0.1 相当于约 10⁸ CFU/mL

枯草芽孢杆菌、乳酸菌等形态不同的菌，换算关系不同，需单独标定。

无法区分死菌与活菌：OD值反映的是所有颗粒的总散射，包括死菌、碎片等。

选择 OD600 测定细菌浓度，是因为它：

避开了细菌内部分子的强吸收峰，减少干扰；

主要反映细菌颗粒引起的光散射，与细胞数量相关；

对常见培养基颜色不敏感，背景干扰小；

设备普及、操作简便、重复性好；

已成为科研和检测领域的通用标准。

因此，OD600 是一种快速、无损、经济、可重复的细菌浓度估算方法，特别适合食品微生物、发酵工程、实验室研究中的日常监测。但在精确量化或特殊菌种检测时，应结合平板计数（CFU） 或细胞计数器等方法进行校准。