食品检验员掌握滤膜过滤法 (Membrane Filtration) 是其进行低微生物含量样品（如饮用水、瓶装水、饮料、某些药品）中细菌总数、大肠菌群或特定致病菌检测的重要技术。该方法通过将一定体积的液体样品抽滤，使水中的微生物被截留在微孔滤膜上，然后将滤膜转移到选择性培养基上培养，通过计数滤膜上的菌落来推算出原样品中的微生物数量。

一、 方法原理

利用孔径为 0.45 μm 的微孔滤膜作为“筛子”，当液体样品在负压作用下通过滤膜时，大于孔径的微生物细胞会被物理截留在滤膜表面。随后，将滤膜正面朝上放置在合适的固体培养基平板上，在适宜条件下培养。被截留的活微生物在滤膜上生长并形成肉眼可见的菌落。通过计数这些菌落，并根据过滤的样品体积，即可计算出单位体积样品中的微生物浓度（CFU/mL）。

二、 标准操作流程

1. 器材与试剂准备

无菌器材：滤器（杯体、底座、夹子）、镊子、无菌水。

滤膜：直径与滤器匹配（常用47mm），孔径 0.45 μm，材质为硝酸纤维素或醋酸纤维素。使用前需灭菌（通常已预灭菌包装）。

培养基：

细菌总数：营养琼脂 (NA) 或胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA)。

大肠菌群/大肠杆菌：M-Endo 琼脂、m-TEC 琼脂、CHROMagar™等选择性/显色培养基。

真空泵：提供负压抽滤。

无菌生理盐水或缓冲液：用于冲洗和稀释（若需要）。

2. 滤器组装与灭菌

在超净台内，用无菌镊子取一片滤膜，放入滤器底座的支撑网上（光滑面朝上，即菌落生长面）。

小心旋紧滤器杯体，确保密封良好。

连接抽滤瓶和真空泵。整个系统在使用前应是无菌的（可预先高温灭菌或使用一次性无菌滤器）。

3. 样品过滤

打开真空泵，检查系统是否漏气（滤膜边缘不应有气泡快速逸出）。

用量筒准确量取规定体积的样品（通常100 mL用于饮用水，也可根据污染程度调整为10 mL, 1 L等）。

将样品缓慢倒入滤器杯体中。

开启真空泵，使样品在负压下通过滤膜。水流尽后，继续抽滤约30秒，以确保滤膜干燥，便于后续转移。

（可选）如果样品可能含有抑制物或需要浓缩，可用少量无菌生理盐水冲洗杯体内壁，一并抽滤。

4. 滤膜转移与培养

关闭真空泵，释放负压。

用无菌镊子小心打开滤器，夹住滤膜边缘，将其从支撑网上取下。

将滤膜正面（截留微生物的一面）朝上，轻轻放置在已凝固的培养基平板中央。

确保滤膜与培养基表面完全接触，无气泡或褶皱。

每个样品可做平行或多份不同培养基。

将平板倒置放入恒温培养箱中，在规定的温度和时间下培养。

细菌总数：36±1°C，48±2小时。

大肠菌群：根据培养基要求，可能为35±0.5°C 24小时或更长时间。

5. 菌落观察与计数

培养结束后，取出平板。

观察滤膜上的菌落。

非选择性培养基 (NA/TSA)：所有生长的菌落均计数。

选择性/显色培养基 (M-Endo, CHROMagar™)：根据标准，计数符合特征的菌落（如金属光泽、特定颜色）。

使用菌落计数器或放大镜计数滤膜上的菌落数 (C)。

6. 结果计算与报告

公式：

微生物浓度 (CFU/mL) = C / V

C：滤膜上计数的菌落数

V：过滤的样品体积 (mL)

举例：过滤了100 mL水样，在NA平板上计数到45个菌落，则结果为 45 CFU/100mL 或 0.45 CFU/mL。

报告：按标准要求报告，如“未检出”（当过滤1L仍无菌落时）、具体数值。

三、 化学检验员注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，防止环境污染。镊子使用前后需火焰灭菌。

滤膜选择：必须使用 0.45 μm 孔径的滤膜。滤膜材质应与样品兼容（如强酸强碱可能腐蚀硝酸纤维素）。

滤膜方向：转移时务必保证截留面（正面）朝上接触培养基，否则微生物无法获得营养。

避免堵塞：如果样品浑浊或含颗粒物多，可能会堵塞滤膜。可先低速离心或使用更大孔径的预滤膜。

抽滤时间：抽干后不宜过长，以免损伤微生物或使滤膜过干难以取下。

滤膜贴合：转移后确保滤膜与培养基紧密贴合，否则边缘菌落可能不生长。

培养基选择：根据检测目标选择正确的培养基。显色培养基能提高鉴定准确性。

安全防护：处理潜在污染样品时，佩戴个人防护装备。实验后对滤器、滤膜、废液进行高压灭菌处理。

四、 方法优缺点

五、 总结

滤膜过滤法是食品检验员（特别是水质检验领域）不可或缺的技术。其核心优势在于能够通过过滤大体积样品来浓缩和捕获极低浓度的微生物，从而实现对清洁液体（如饮用水）中微生物的精确检测。