免疫标记技术（Immunoassay Technology）是一种利用抗原与抗体之间特异性结合的原理，通过将抗体或抗原与可检测的“标记物”结合，从而实现对目标物质（如蛋白质、激素、病原体、毒素等）进行高灵敏度、高特异性检测的分析方法。该技术广泛应用于食品安全、医学诊断、环境监测、生物研究等领域，尤其在食品检验中，常用于检测食品中的致病菌、毒素、过敏原、兽药残留、农药残留等微量有害物质。

一、免疫标记技术的基本原理

免疫标记技术的核心是抗原-抗体反应的特异性和标记物的可检测性。

特异性识别：抗体能够特异性地识别并结合其对应的抗原（目标物质）。

信号放大与检测：通过将抗体或抗原与一种可产生信号的“标记物”连接，当抗原-抗体结合后，可通过检测标记物发出的信号来判断目标物质的存在和含量。

二、常见的免疫标记技术类型

1. 酶联免疫吸附测定（ELISA, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）

原理：将抗体或抗原固定在固相载体（如微孔板）上，加入待测样品，再加入酶标记的抗体，形成“夹心”或竞争性复合物，最后加入底物，酶催化底物产生颜色变化，通过酶标仪测定吸光度值进行定量。

类型：

直接ELISA

间接ELISA

夹心ELISA（常用于大分子抗原）

竞争ELISA（常用于小分子半抗原，如农药、兽药残留）

优点：灵敏度高、操作简便、可批量检测。

应用：检测黄曲霉毒素、三聚氰胺、瘦肉精、沙门氏菌等。

2. 胶体金免疫层析技术（GICA, Colloidal Gold Immunochromatography Assay）

原理：利用胶体金颗粒作为标记物，结合抗原-抗体反应，在硝酸纤维素膜上进行层析，形成可见的红色条带。

形式：试纸条或卡式检测。

优点：快速（5–15分钟出结果）、无需仪器、适合现场检测。

应用：快速检测金黄色葡萄球菌、李斯特菌、HCG（妊娠）、新冠病毒抗原等。

3. 荧光免疫分析（FIA, Fluorescence Immunoassay）

原理：使用荧光物质（如FITC、罗丹明、量子点）标记抗体，抗原-抗体结合后，在特定波长光激发下发出荧光，通过荧光检测仪定量。

优点：灵敏度极高、可实现多重检测。

应用：高灵敏度检测生物毒素、激素残留等。

4. 化学发光免疫分析（CLIA, Chemiluminescence Immunoassay）

原理：使用化学发光物质（如鲁米诺、AMPPD）标记抗体，反应后产生光信号，通过化学发光仪检测。

优点：灵敏度极高（可达pg/mL级）、线性范围宽、背景低。

应用：医学检验中广泛应用，食品中痕量污染物检测也逐步推广。

5. 放射免疫分析（RIA, Radioimmunoassay）

原理：使用放射性同位素（如¹²⁵I）标记抗原或抗体，通过测量放射性强度来定量。

缺点：存在放射性污染风险，操作复杂，需特殊防护。

现状：在食品检验中已基本被非放射性方法取代。

三、免疫标记技术在食品检验中的主要应用

四、免疫标记技术的优点与局限性

优点：

高特异性：基于抗原-抗体的专一结合。

高灵敏度：可检测ng/g甚至pg/g级别的目标物。

操作简便：尤其胶体金试纸条，适合现场快速筛查。

通量高：ELISA可同时检测96个样品。

成本相对较低：尤其适用于大批量初筛。

局限性：

交叉反应：抗体可能与其他结构相似物质发生非特异结合。

基质干扰：食品复杂成分可能影响检测结果（需样品前处理）。

半定量或定量范围有限：部分方法（如胶体金）仅能定性或半定量。

抗体稳定性：受温度、pH等影响，需妥善保存。

五、发展趋势

多联检技术：一个检测系统同时检测多种目标物（如多重荧光、芯片式ELISA）。

便携化与智能化：开发手持式读数仪、智能手机连接的检测平台。

纳米材料应用：如量子点、磁性纳米颗粒、石墨烯等提高灵敏度和稳定性。

与分子生物学技术结合：如免疫-PCR，进一步提升检测极限。

免疫标记技术是现代食品检验中不可或缺的工具，尤其在快速筛查和痕量物质检测方面具有显著优势。食品检验员应掌握不同免疫标记技术的原理、操作流程和适用范围，结合样品特性选择合适的方法，并注意质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性。随着技术进步，免疫检测正朝着更快速、更灵敏、更智能的方向发展。