双歧杆菌（Bifidobacterium spp.）是一类对人类健康有益的益生菌，广泛应用于乳制品、功能性食品及膳食补充剂中。食品检验员在对含有双歧杆菌的产品进行检验时，需要确认产品的双歧杆菌含量是否符合标签声明，并确保产品未被其他潜在有害微生物污染。以下是关于双歧杆菌检验的具体方法和步骤：

检验方法

1. 样品采集

使用无菌工具从不同包装或批次的产品中取样，确保样本具有代表性。

样品应立即放入无菌容器中，并尽快送往实验室分析。

2. 前处理

如果是固体样品，需将其适当稀释并均质化；如果是液体样品，则直接进行稀释。

通常采用磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水进行稀释。

3. 选择性培养基接种

取适量稀释后的样品液接种到适合双歧杆菌生长的选择性培养基上，如：

MRS琼脂：添加了莫匹罗星锂盐和半胱氨酸的选择性添加剂，可以抑制大多数非目标细菌的生长。

TPY琼脂：另一种常用的选择性培养基，特别适合于双歧杆菌的分离与培养。

在厌氧条件下（使用厌氧罐或厌氧袋），在37°C下培养48至72小时。

4. 菌落计数

培养结束后，观察并记录培养基上的菌落形态特征。双歧杆菌形成的菌落通常是圆形、光滑且凸起的，颜色可能为白色或淡黄色。

对典型菌落进行计数，计算每克或每毫升样品中的双歧杆菌数量（CFU/g 或 CFU/mL）。

5. 鉴定试验

为了进一步确认所分离出的菌落确实是双歧杆菌，可以进行以下鉴定试验：

显微镜检查：制备菌悬液涂片后，用革兰氏染色法观察，双歧杆菌应呈革兰氏阳性，形态多样，包括分枝状、杆状等。

生化试验：

产酸反应：双歧杆菌发酵碳水化合物产生乳酸和其他有机酸。

耐氧性测试：双歧杆菌为严格厌氧菌，但在低氧环境中也能生存。

酶活性测定：如明胶液化试验、硝酸盐还原试验等，这些试验有助于区分不同的双歧杆菌种。

分子生物学方法：

PCR技术：通过特异性引物扩增双歧杆菌的特定基因序列，如16S rRNA基因，以确认其身份。

DNA指纹图谱分析：如脉冲场凝胶电泳（PFGE）或随机扩增多态性DNA（RAPD），用于进一步分类和鉴定。

注意事项

实验室环境控制：保持良好的实验室卫生条件，防止交叉污染。特别是在操作厌氧菌时，必须确保工作环境的无菌状态。

人员培训：所有操作人员需经过严格的专业训练，熟悉标准操作程序。

设备校准：定期检查和维护实验设备，保证数据准确性。

结果解读：根据相关国家标准或行业规范解释检测结果，必要时采取相应措施。

相关标准

在中国，对于含有双歧杆菌产品的质量控制主要依据以下国家标准：

GB 19462《食品安全国家标准 发酵乳》：规定了发酵乳制品中益生菌的最低活菌数要求。

GB 4789系列《食品安全国家标准 食品微生物学检验》：提供了详细的微生物检测方法，包括双歧杆菌在内的多种微生物的检验指南。

通过上述方法，食品检验员能够有效地监控含有双歧杆菌的产品的质量，确保产品中的双歧杆菌含量达到预期效果，并保障消费者的健康安全。同时，持续关注最新的技术和法规变化也是提高检验水平的关键。此外，加强生产过程中的质量控制同样重要，以确保产品的一致性和安全性。