霉菌和酵母的平板计数法是评估食品中真菌污染水平的重要手段之一，尤其对于农产品及其制品来说，这项检测有助于确保食品安全性和延长保质期。以下是霉菌和酵母平板计数的具体步骤：

霉菌和酵母平板计数法

所需材料与设备

培养基：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA, Potato Dextrose Agar）或孟加拉红琼脂（Rose Bengal Agar），这些培养基能促进霉菌和酵母的生长，并抑制细菌生长。

稀释液：无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液。

实验器材：无菌移液管、无菌试管、无菌培养皿、均质器或搅拌棒等。

恒温培养箱：能够维持在25℃至28℃之间，适合霉菌和酵母生长的最佳温度范围。

其他：酒精灯、接种环等常规实验室器具。

操作步骤

样品制备与稀释

取适量代表性样品（如25g），加入到含有225ml无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的均质袋中。

使用均质器将样品充分混匀，制成1:10的初始稀释液。

根据需要进行进一步稀释，准备三个连续稀释度（如10^-1, 10^-2, 10^-3）。

接种与涂布

选择合适的稀释度（通常选择三个连续稀释度），每个稀释度取1ml均匀涂布于预先准备好的固体培养基表面。

使用无菌玻璃棒或L型棒将液体均匀涂布在整个平板上，避免形成液滴堆积。

培养

将涂布后的培养皿倒置放入预热至25℃至28℃的恒温培养箱中，培养时间通常为5天（某些情况下可能需要更长时间，如7天）。

计数菌落

培养结束后，在明亮背景下用肉眼观察培养皿上的霉菌和酵母菌落形成单位（CFU）。理想的计数范围应在15-150 CFU之间；如果超出此范围，则需要调整稀释倍数重新测试。

计算每个稀释度下的平均菌落数量，按照公式计算原始样品中的霉菌和酵母总数：

菌落总数（CFU/g或CFU/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体积菌落总数（CFU/g或CFU/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体积

注意事项

无菌操作：整个过程必须严格遵守无菌技术，避免外界微生物污染影响结果准确性。

培养条件控制：确保培养温度和时间符合标准要求，不同类型的微生物可能需要不同的培养条件。霉菌和酵母最适合在较温暖但低于人体体温的条件下生长。

记录详细信息：包括样品来源、处理方式、稀释度、培养条件等，以便后续分析和追踪。

区分霉菌和酵母：霉菌通常表现为丝状或绒毛状生长，而酵母则呈现为光滑的圆形或卵形菌落。在计数时应尽量区分两者，虽然有时可以合并报告总数量。

法规遵循：所有操作须符合国家相关食品安全标准和法律法规要求，确保检测结果合法有效。

通过上述方法，农产品食品检验员可以有效地测定食品中的霉菌和酵母含量，从而评估其卫生状况并采取相应的措施来保障食品安全。此外，随着技术的进步，现在也有一些自动化仪器可用于快速检测霉菌和酵母的数量，这些方法可以在较短时间内提供结果，提高了工作效率。然而，传统的平板计数法仍然是最基础也是最可靠的方法之一。