测定茶叶中的霉菌和酵母菌数量是确保其卫生安全的重要步骤，因为这些微生物的存在可能表明产品在加工或储存过程中受到了污染，从而影响消费者的健康。常用的检测方法主要是基于培养基的平板计数法。以下是详细的测定步骤及注意事项。

测定方法概述

所需工具与材料

无菌采样瓶

无菌生理盐水或其他稀释液

均质器或振荡器

无菌移液管或移液枪

无菌培养皿

霉菌和酵母菌专用培养基（如孟加拉红培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基PDA）

恒温培养箱

显微镜（可选，用于确认菌落形态）

测定步骤

1. 样品准备

样品选取：

准确称取适量的茶叶样品（通常为25克），确保样品具有代表性。对于块状或条形茶叶，可以先将其粉碎以增加表面积，有助于更均匀地分散微生物。

制备样品悬液：

将称好的茶叶样品放入装有225毫升无菌生理盐水或其他稀释液的无菌采样瓶中。

使用均质器或振荡器将样品充分混合均匀，制成1:10的样品悬液（即1份样品加入9份稀释液）。如果需要进一步稀释，可以继续按比例稀释。

2. 平板接种

稀释样品：

使用无菌移液管或移液枪从样品悬液中吸取1毫升液体，加入到含有9毫升无菌稀释液的试管中，混匀后制成1:100的稀释液。根据预计的微生物数量，可以选择不同的稀释度进行接种。

接种培养基：

取不同稀释度的样品悬液各1毫升，分别接种到预先制备好的无菌培养皿中。

向每个培养皿中倒入约15-20毫升已冷却至45°C左右的霉菌和酵母菌专用培养基（如孟加拉红培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基PDA），轻轻旋转培养皿使培养基与样品悬液充分混合均匀。

凝固培养基：

让培养皿静置直至培养基完全凝固。

3. 培养条件

培养温度和时间：

将接种后的培养皿倒置于25-28°C的恒温培养箱中培养，霉菌和酵母菌的培养时间为5天。某些情况下，可能需要延长培养时间至7天，具体依据标准要求而定。

4. 菌落计数

观察菌落：

在培养结束后，使用肉眼或放大镜观察培养皿上的菌落形态。霉菌通常表现为丝状或绒毛状生长，颜色多样；酵母菌则多呈现为圆形、光滑的菌落。

计数菌落：

对于每个稀释度的培养皿，选择菌落数量在15-150之间的培养皿进行计数。记录下该稀释度下的菌落数量，并乘以相应的稀释倍数，计算出每克茶叶中的霉菌和酵母菌总数。

结果报告：

结果通常以CFU/g（菌落形成单位每克）的形式报告。例如，如果在一个1:100稀释度的培养皿中计数得到30个菌落，则该样品的霉菌和酵母菌含量为30×100=3000 CFU/g。

注意事项

无菌操作：整个过程必须严格遵循无菌操作规程，避免外界微生物污染样品。

培养基选择：选用适合霉菌和酵母菌生长的选择性培养基，以抑制其他非目标微生物的生长。

稀释度选择：根据样品预期的微生物负荷选择合适的稀释度，以便获得准确的计数结果。

重复实验：为了提高结果的准确性，建议对每个样品至少进行两次独立测定，并取平均值作为最终结果。

环境控制：确保实验室环境清洁，避免交叉污染。

实际应用中的考虑

在实际操作过程中，可能需要根据具体的茶叶类型调整某些参数，比如样品量、稀释度等，以适应特定的产品特性。此外，还应参照最新的国家标准或行业指南执行相应的检测流程。在中国，可以参考GB 4789.15《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》等相关标准来进行具体操作。

通过这些步骤，食品检验员能够有效地测定茶叶中的霉菌和酵母菌数量，从而评估产品的卫生安全性。这不仅有助于提升产品质量，还能增强消费者信任度。