大肠菌群和致病菌检验测试技术
一、快速测试适用范围：适用于各类食品、纯净水等样品中大肠菌群数检测，致病菌(沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌)的快速筛查或进一步检测；致病性沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血弧菌、致泻大肠埃希菌、腊样芽孢杆菌、板奇肠杆菌检测的前期增菌预实验观察以及大肠菌群污染程度的检测。
二.快速检验方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用。依据国标GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技术将相对应培养基包被在试剂盒底部，随时取用。省去了实验前的大量准备工作，方便、快捷。
三、快速检验操作方法：
（1）样品处理：按《食品卫生微生物学检验》GB/T4789.3.4.5.10-2003。2 加样：将试剂盒放在台面上，打开盒盖，用无菌吸管吸取3个1：10稀释液10mL分别加入试剂盒3个大发酵培养基孔内，用无菌吸管吸取3个1mL分别加入试剂盒3小发酵培养基孔内。另用无菌吸管取1：10稀释后的样品1mL注入到9mL灭菌生理盐水中(1：100)取此管3个1mL稀释液加入到试剂盒另3个小发酵培养基孔内。另用无菌吸管吸取稀释后的样品3个4mL分别加入致病菌增菌管(孔)(A、B、C)孔内。3 排气泡: 加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜，(图1)必要时可轻轻用力在桌面敲击数下即可排出集气窗内气泡。4 培养：将加样后的试剂盒置36℃± 1℃温箱中，培养18～24h。
（2）致病菌检测：1加样：用灭菌吸管吸取原液或1:10样品稀释液4ml～10 ml(不得少于4ml)分别加入到标号为1、2、3、A、B、C的增菌格(孔)内。加样后的1、2、3号分别为副溶血弧菌、致泻大肠埃希菌、板奇肠杆菌增菌液;A、B、C分别为金黄色葡萄球菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌增菌液。2培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养6～18小时。3 观察结果：如果某致病菌的增菌液发生浑浊，即预示含有此种致病菌。可将浑浊液接种于各相对应的选择性培养基上或接种于相对应的测试片上。置36℃±1℃培养箱内培养，18～24小时观察验证结果。
四、大肠菌检测：1加样：将试剂盒放在试验台面上，打开盒盖，用灭菌吸管分别吸取3个原液或1:10样品稀释液1ml加到标号为4、5、6的小培养基孔内。另用灭菌吸管分别吸取3个1:10或1:100的样品稀释液1ml加到标号为7、8、9的小培养基孔内，标号为10的小培养基孔内可加入1ml灭菌生理盐水作为培养基阴性对照孔使用。2排气泡：加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜使气泡排出，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下排出气泡。3培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养18～24小时。5. 注意事项：1加入样品后不需摇匀，平拿平放。2 加样时可用一次性无菌塑料吸管，将样品稀释液加至试剂盒所标刻度处。3 在培养箱中取试剂盒时应平托出来，不要倾斜以免由于试剂盒的倾斜将阳性管集气窗中的气泡排出而影响结果。4观察结果：样液变为黄色为产酸、集气窗中有气泡为产气，产酸产气者为阳性结果，阳性结果的孔数越多，说明污染越严重。
二.快速检验方法原理：与国标法相同。事先将浓缩乳糖胆盐培养基、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、GN增菌液、7.5%氯化钠培养基、包被在试剂盒中，随时取用。依据国标GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技术将相对应培养基包被在试剂盒底部，随时取用。省去了实验前的大量准备工作，方便、快捷。
三、快速检验操作方法：
（1）样品处理：按《食品卫生微生物学检验》GB/T4789.3.4.5.10-2003。2 加样：将试剂盒放在台面上，打开盒盖，用无菌吸管吸取3个1：10稀释液10mL分别加入试剂盒3个大发酵培养基孔内，用无菌吸管吸取3个1mL分别加入试剂盒3小发酵培养基孔内。另用无菌吸管取1：10稀释后的样品1mL注入到9mL灭菌生理盐水中(1：100)取此管3个1mL稀释液加入到试剂盒另3个小发酵培养基孔内。另用无菌吸管吸取稀释后的样品3个4mL分别加入致病菌增菌管(孔)(A、B、C)孔内。3 排气泡: 加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜，(图1)必要时可轻轻用力在桌面敲击数下即可排出集气窗内气泡。4 培养：将加样后的试剂盒置36℃± 1℃温箱中，培养18～24h。
（2）致病菌检测：1加样：用灭菌吸管吸取原液或1:10样品稀释液4ml～10 ml(不得少于4ml)分别加入到标号为1、2、3、A、B、C的增菌格(孔)内。加样后的1、2、3号分别为副溶血弧菌、致泻大肠埃希菌、板奇肠杆菌增菌液;A、B、C分别为金黄色葡萄球菌、沙门菌、腊样芽孢杆菌增菌液。2培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养6～18小时。3 观察结果：如果某致病菌的增菌液发生浑浊，即预示含有此种致病菌。可将浑浊液接种于各相对应的选择性培养基上或接种于相对应的测试片上。置36℃±1℃培养箱内培养，18～24小时观察验证结果。
四、大肠菌检测：1加样：将试剂盒放在试验台面上，打开盒盖，用灭菌吸管分别吸取3个原液或1:10样品稀释液1ml加到标号为4、5、6的小培养基孔内。另用灭菌吸管分别吸取3个1:10或1:100的样品稀释液1ml加到标号为7、8、9的小培养基孔内，标号为10的小培养基孔内可加入1ml灭菌生理盐水作为培养基阴性对照孔使用。2排气泡：加样后集气窗内如有气泡存在，可将试剂盒以30～45度角倾斜使气泡排出，必要时可轻轻用力在桌面上敲击数下排出气泡。3培养：将加样后的试剂盒盖上盖，平放在36℃±1℃培养箱内培养18～24小时。5. 注意事项：1加入样品后不需摇匀，平拿平放。2 加样时可用一次性无菌塑料吸管，将样品稀释液加至试剂盒所标刻度处。3 在培养箱中取试剂盒时应平托出来，不要倾斜以免由于试剂盒的倾斜将阳性管集气窗中的气泡排出而影响结果。4观察结果：样液变为黄色为产酸、集气窗中有气泡为产气，产酸产气者为阳性结果，阳性结果的孔数越多，说明污染越严重。
