天然泉水水源水大肠菌群检验作业指导书
1.0 水源水
1.1 范围
本法适用于天然泉水水源水大肠菌群的检验。
1.2 原理
根据大肠菌群细菌具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃培养24h能发酵乳糖并产气的特点，将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中，经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的MPN值。
1.3 培养基和试剂
1.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。
1.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）。
1.3.3 灭菌生理盐水。
1.4 仪器
1.4.1 超净工作台。
1.4.2 高压蒸汽灭菌锅。
1.4.3 培养箱：36℃±1℃。
1.4.4 冰箱：0℃～8℃
1.4.5 电子天平：感量0.1g。
1.4.6 培养皿。
1.4.7 小倒管。
1.4.8 试管：150mm×20mm,140mm×15mm。
1.4.9 吸管：10mL、5mL、1mL。
1.4.10 接种环。
1.4.11 酒精灯。
1.5 检测步骤
1.5.1 推测性检验
1.5.1.1 吸取10mL水样接种到盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。
1.5.1.2 吸取1mL水样接种到盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。
1.5.1.3 另吸取1mL水样接种到9mL灭菌生理盐水中，混匀，用5mL灭菌吸管吸取5mL稀释液，分别加到5支盛有10mL单料乳糖胆盐发酵培养液中，每管1mL（即0.1mL水样）。轻摇试管，使液体充分混合，置36℃±1℃培养箱内培养24h。观察每支管是否产气，若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。
1.5.2 确证性试验
1.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）管中，置36℃±1℃培养箱中培养48h。
1.5.2.2 观察BGB管中的产气情况，如有气体产生，就可确定为“大肠菌群阳性”；如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下BGB管里产气的阳性管数，查大肠菌群（MPN）检索表可得出水样中大肠菌群的MPN值。
1.5.3 MPN值计算
如水样含菌量少，也可按100mL、10mL、1mL接种，那么其实际MPN值应为表中的MPN值除以10；反之如含菌量较多，也可接种1mL、0.1mL、0.01mL，其实际MPN值应为表中的MPN值乘以10，余此类推。
大肠菌群（MPN）检索表
（总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样）
|
接种量/mL |
MPN/100mL |
接种量/mL |
MPN/100mL |
||||
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
||
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0 |
0 |
0 |
0 |
1 |
0 |
1 |
1 |
|
0 |
0 |
1 |
2 |
1 |
0 |
2 |
6 |
|
0 |
0 |
2 |
4 |
1 |
0 |
3 |
8 |
|
0 |
0 |
3 |
5 |
1 |
0 |
4 |
10 |
|
0 |
0 |
4 |
7 |
1 |
0 |
5 |
12 |
|
0 |
0 |
5 |
9 |
1 |
1 |
0 |
1 |
|
0 |
1 |
0 |
2 |
1 |
1 |
1 |
6 |
|
0 |
1 |
1 |
4 |
1 |
1 |
2 |
8 |
|
0 |
1 |
2 |
6 |
1 |
1 |
3 |
10 |
|
0 |
1 |
3 |
7 |
1 |
1 |
4 |
12 |
|
0 |
1 |
4 |
9 |
1 |
1 |
5 |
14 |
|
0 |
1 |
5 |
11 |
1 |
2 |
0 |
6 |
|
0 |
2 |
0 |
4 |
1 |
2 |
1 |
8 |
|
0 |
2 |
1 |
6 |
1 |
2 |
2 |
10 |
|
0 |
2 |
2 |
7 |
1 |
2 |
3 |
12 |
|
0 |
2 |
3 |
9 |
1 |
2 |
4 |
15 |
|
接种量/mL |
MPN/100mL |
接种量/mL |
MPN/100mL |
||||
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
||
|
0 |
2 |
4 |
11 |
1 |
2 |
5 |
17 |
|
0 |
2 |
5 |
13 |
1 |
3 |
0 |
8 |
|
0 |
3 |
0 |
6 |
1 |
3 |
1 |
10 |
|
0 |
3 |
1 |
7 |
1 |
3 |
2 |
12 |
|
0 |
3 |
2 |
9 |
1 |
3 |
3 |
15 |
|
0 |
3 |
3 |
11 |
1 |
3 |
4 |
17 |
|
0 |
3 |
4 |
13 |
1 |
3 |
5 |
19 |
|
0 |
3 |
5 |
15 |
1 |
4 |
0 |
11 |
|
0 |
4 |
0 |
8 |
1 |
4 |
1 |
13 |
|
0 |
4 |
1 |
9 |
1 |
4 |
2 |
15 |
|
0 |
4 |
2 |
11 |
1 |
4 |
3 |
17 |
|
0 |
4 |
3 |
13 |
1 |
4 |
4 |
19 |
|
0 |
4 |
4 |
15 |
1 |
4 |
5 |
22 |
|
0 |
4 |
5 |
17 |
1 |
5 |
0 |
13 |
|
0 |
5 |
0 |
9 |
1 |
5 |
1 |
15 |
|
0 |
5 |
1 |
11 |
1 |
5 |
2 |
17 |
|
0 |
5 |
2 |
13 |
1 |
5 |
3 |
19 |
|
0 |
5 |
3 |
15 |
1 |
5 |
4 |
22 |
|
0 |
5 |
4 |
17 |
1 |
5 |
5 |
24 |
|
0 |
5 |
5 |
19 |
2 |
0 |
0 |
5 |
|
1 |
0 |
0 |
2 |
2 |
0 |
1 |
7 |
|
2 |
0 |
2 |
9 |
3 |
1 |
5 |
27 |
|
2 |
0 |
3 |
12 |
3 |
2 |
0 |
14 |
|
2 |
0 |
4 |
14 |
3 |
2 |
1 |
17 |
|
2 |
0 |
5 |
16 |
3 |
2 |
2 |
20 |
|
2 |
1 |
0 |
7 |
3 |
2 |
3 |
24 |
|
2 |
1 |
1 |
9 |
3 |
2 |
4 |
27 |
|
2 |
1 |
2 |
12 |
3 |
2 |
5 |
31 |
|
接种量/mL |
MPN/100mL |
接种量/mL |
MPN/100mL |
||||
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
||
|
2 |
1 |
3 |
14 |
3 |
3 |
0 |
17 |
|
2 |
1 |
4 |
17 |
3 |
3 |
1 |
21 |
|
2 |
1 |
5 |
19 |
3 |
3 |
2 |
24 |
|
2 |
2 |
0 |
9 |
3 |
3 |
3 |
28 |
|
2 |
2 |
1 |
12 |
3 |
3 |
4 |
32 |
|
2 |
2 |
2 |
14 |
3 |
3 |
5 |
36 |
|
2 |
2 |
3 |
17 |
3 |
4 |
0 |
21 |
|
2 |
2 |
4 |
19 |
3 |
4 |
1 |
24 |
|
2 |
2 |
5 |
22 |
3 |
4 |
2 |
28 |
|
2 |
3 |
0 |
12 |
3 |
4 |
3 |
32 |
|
2 |
3 |
1 |
14 |
3 |
4 |
4 |
36 |
|
2 |
3 |
2 |
17 |
3 |
4 |
5 |
40 |
|
2 |
3 |
3 |
20 |
3 |
5 |
0 |
25 |
|
2 |
3 |
4 |
22 |
3 |
5 |
1 |
29 |
|
2 |
3 |
5 |
25 |
3 |
5 |
2 |
32 |
|
2 |
4 |
0 |
15 |
3 |
5 |
3 |
37 |
|
2 |
4 |
1 |
17 |
3 |
5 |
4 |
41 |
|
2 |
4 |
2 |
20 |
3 |
5 |
5 |
45 |
|
2 |
4 |
3 |
23 |
4 |
0 |
0 |
13 |
|
2 |
4 |
4 |
25 |
4 |
0 |
1 |
17 |
|
2 |
4 |
5 |
28 |
4 |
0 |
2 |
21 |
|
2 |
5 |
0 |
17 |
4 |
0 |
3 |
25 |
|
2 |
5 |
1 |
20 |
4 |
0 |
4 |
30 |
|
2 |
5 |
2 |
23 |
4 |
0 |
5 |
36 |
|
2 |
5 |
3 |
26 |
4 |
1 |
0 |
17 |
|
2 |
5 |
4 |
29 |
4 |
1 |
1 |
21 |
|
2 |
5 |
5 |
32 |
4 |
1 |
2 |
26 |
|
3 |
0 |
0 |
8 |
4 |
1 |
3 |
31 |
|
接种量/mL |
MPN/100mL |
接种量/mL |
MPN/100mL |
||||
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
||
|
3 |
0 |
1 |
11 |
4 |
1 |
4 |
36 |
|
3 |
0 |
2 |
13 |
4 |
1 |
5 |
42 |
|
3 |
0 |
3 |
16 |
4 |
2 |
0 |
22 |
|
3 |
0 |
4 |
20 |
4 |
2 |
1 |
26 |
|
3 |
0 |
5 |
23 |
4 |
2 |
2 |
32 |
|
3 |
1 |
0 |
11 |
4 |
2 |
3 |
38 |
|
3 |
1 |
1 |
14 |
4 |
2 |
4 |
44 |
|
3 |
1 |
2 |
17 |
4 |
2 |
5 |
50 |
|
3 |
1 |
3 |
20 |
4 |
3 |
0 |
27 |
|
3 |
1 |
4 |
23 |
4 |
3 |
1 |
33 |
|
4 |
3 |
2 |
39 |
5 |
1 |
4 |
110 |
|
4 |
3 |
3 |
45 |
5 |
1 |
2 |
130 |
|
4 |
3 |
4 |
52 |
5 |
2 |
0 |
49 |
|
4 |
3 |
5 |
59 |
5 |
2 |
1 |
70 |
|
4 |
4 |
0 |
34 |
5 |
2 |
2 |
94 |
|
4 |
4 |
1 |
40 |
5 |
2 |
3 |
120 |
|
4 |
4 |
2 |
47 |
5 |
2 |
4 |
150 |
|
4 |
4 |
3 |
54 |
5 |
2 |
5 |
180 |
|
4 |
4 |
4 |
62 |
5 |
3 |
0 |
79 |
|
4 |
4 |
5 |
69 |
5 |
3 |
1 |
110 |
|
4 |
5 |
0 |
41 |
5 |
3 |
2 |
140 |
|
4 |
5 |
1 |
48 |
5 |
3 |
3 |
180 |
|
4 |
5 |
2 |
56 |
5 |
3 |
4 |
210 |
|
4 |
5 |
3 |
64 |
5 |
3 |
5 |
250 |
|
4 |
5 |
4 |
72 |
5 |
4 |
0 |
130 |
|
4 |
5 |
5 |
81 |
5 |
4 |
1 |
170 |
|
5 |
0 |
0 |
23 |
5 |
4 |
2 |
220 |
|
5 |
0 |
1 |
31 |
5 |
4 |
3 |
280 |
|
接种量/mL |
MPN/100mL |
接种量/mL |
MPN/100mL |
||||
|
10 |
1 |
0.1 |
10 |
1 |
0.1 |
||
|
5 |
0 |
2 |
43 |
5 |
4 |
4 |
350 |
|
5 |
0 |
3 |
58 |
5 |
4 |
5 |
430 |
|
5 |
0 |
4 |
76 |
5 |
5 |
0 |
240 |
|
5 |
0 |
5 |
95 |
5 |
5 |
1 |
350 |
|
5 |
1 |
0 |
33 |
5 |
5 |
2 |
540 |
|
5 |
1 |
1 |
46 |
5 |
5 |
3 |
920 |
|
5 |
1 |
2 |
63 |
5 |
5 |
4 |
1600 |
|
5 |
1 |
3 |
84 |
5 |
5 |
5 |
>1600 |
2.0 成品水
2.1 范围
本法适用于天然泉水成品水大肠菌群的检验。
2.2 原理
根据大肠菌群细菌具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌，在37℃培养24h能发酵乳糖并产气的特点，将不同量的水样接种到含乳糖的培养基中，经培养后根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的MPN值。
2.3 培养基和试剂
2.3.1 乳糖胆盐发酵培养液。
2.3.2 亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）。
2.3.3 灭菌生理盐水。
2.4 仪器
2.4.1 超净工作台。
2.4.2 高压蒸汽灭菌锅。
2.4.3 培养箱：36℃±1℃。
2.4.4 冰箱：0℃～8℃
2.4.5 电子天平：感量0.1g。
2.4.6 培养皿。
2.4.7 小倒管。
2.4.8 试管：150mm×20mm,140mm×15mm。
2.4.9 吸管：10mL。
2.4.10 接种环。
2.4.11 酒精灯。
2.5 检测步骤
2.5.1 推测性检验
2.5.1.1 吸取10mL水样接种到盛有10mL双料乳糖胆盐发酵培养液中，共接种5份。
2.5.1.2 轻摇试管，使液体充分混合，置36℃±1℃培养箱内培养24h。观察每支管是否产气，若有气体产生该管则为推测性检验阳性。如不产气则为大肠菌群阴性。
2.5.2 确证性试验
2.5.2.1 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，接种到亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）管中，置36℃±1℃培养箱中培养48h。
2.5.2.2 观察BGB管中的产气情况，如有气体产生，就可确定为“大肠菌群阳性”；如无气体产生则为“大肠菌群阴性”。记下BGB管里产气的阳性管数，查用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限表。
用5管10mL水样时各种阳性和阴性结果组合的MPN值及其95%的可信限
|
阳性反应管数 |
MPN/100mL |
95%可信限 |
|
|
下限 |
上限 |
||
|
0 |
0 |
0 |
6.0 |
|
1 |
2.2 |
0.1 |
12.6 |
|
2 |
5.1 |
0.5 |
19.2 |
|
3 |
9.2 |
1.6 |
29.4 |
|
4 |
16 |
3.3 |
52.9 |
|
5 |
>16 |
8.0 |
无限 |
