农产品真菌类有害生物的检验方法
在植物病害中，大多数是真菌性病害，而且对生产的危害颇为严重。危险性检疫真菌一旦入侵，很难根除或消灭。因此，检验检疫对保护农业生产安全，甚至保障人们生命和生活基本条件，是必不可少的有效措施。
一、小麦矮腥黑穗菌
1 分类地位
小麦矮腥黑穗菌属担子菌亚门、冬孢菌纲、黑粉菌目、黑粉菌科、腥黑粉菌属、麦矮化腥黑穗菌种。
2 主要危害
小麦矮腥黑穗菌主要危害小麦，也侵染大麦、黑麦、冰草等禾本科约 15 个属植物 (包括小麦属、大麦属、燕麦属、黑麦属、山羊草属、冰草属、野麦属、绒草属、毒麦属、雀麦草属、鸭茅属、早熟禾属、三毛草属、剪股颖属、看麦娘属)。小麦矮腥黑穗病是麦类黑穗病中危害最大、最难防治的一种病害，病菌冬孢子在土壤中长期存活 (6～7 年，甚至 10 年)，随土壤传播，一旦传入，难以根除。小麦感染后，一般减产 20%～50% ，某些感病品种可减产 50% 以上，甚至达 90% 。同时，还会影响小麦面粉质量，含孢子过多的面粉有鱼腥味 (含三甲胺)而不宜食用。 1972 年，美国西部7 个州发病面积达 241 万公顷，平均减产 17% ，损失小麦 12 亿多千克。该病系花器侵染的局部性病害，病穗不是所有籽粒都受感染，病粒也不是整个都受破坏。侵染从种脐开始延至腹沟，在表皮下形成黑粉，可侵染到胚乳，但不破坏胚，发病种子仍然萌发。病轻麦粒仅部分受侵染，但形成明显的黑斑。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 筛子、显微镜、离心机、培养皿等。
(2 )形态学检验 冬孢子呈球形或近似球形，黄褐色或褐色，大小为 10～15 μ m ，孢子外壁有刺状突起，网脊尖而长，网目大小为 3～6μ m ，高 1.5～3 μ m ，胶质鞘厚度为 1.5～5.5 μ m ，具有腥味。
(3 )症状和洗涤检查
① 取样及病征检查 样品过筛后，仔细检查有无黑粉病粒及其碎片，可疑者镜检。
② 洗涤检查 步骤如下。
样品加无菌水，振荡 5min 以上，离心 1000r / min ， 5～10min ;沉淀加入几滴席尔液;制片镜检 (每一样品至少 5 片);孢子测量：根据孢子大小、网目高度、网脊高度、网鞘厚度进行判断。如 70% 以上的孢子网脊在 1.5～2.5μ m ，胶质鞘厚度 2～3 μ m ，可鉴定为矮腥黑穗菌，而网腥黑穗菌的上述两参数都小于 1.2μ m 。
(4 )冬孢子显微电泳法 矮腥冬孢子囊由多糖蛋白质和脂类等物质构成，其上带有正电荷，它与网腥冬孢子囊不同。在显微镜下观测，它们在电场中的移动速度也不一致，由此可加以区分。见表 51 。
(5 )冬孢子网脊自发荧光率法 利用矮腥冬孢子网脊自发荧光率高于其他黑粉菌的特性，结合形态特征进行鉴定。
(6 )孢子萌发检验 冬孢子在 3% 水洋菜培养基 ( WA 培养基)上，置于 5℃ 光照培养。一周左右萌发者为网腥冬孢子， 20 天到 3 个月开始萌发者为矮腥冬孢子。网腥冬孢子和矮腥冬孢子的萌芽特征如下。
① 网腥冬孢子：先菌丝较少，有分支，担孢子 (小孢子)一般为 4～16 个;
② 矮腥冬孢子：先菌丝有分支，担孢子数量多，可达 50～60 个。
(7 )其他鉴别新方法 主要包括：冬孢子水解作用;凝集反应;高碘酸消解细胞壁;冬孢子胶鞘负染;冬孢子变形试验，以此来鉴别矮腥黑穗菌和网腥黑穗菌。上述方法中，高碘酸消解细胞壁和冬孢子胶鞘负染法较为简单方便，但由于各地的冬孢子有所不同，有时易与孢子混淆，故最有效、正确的鉴别方法是利用孢子萌芽，其缺点是需时间较长。
二、玉米霜霉菌
1 分类地位
玉米霜霉菌属鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、霜霉科。
2 危害性
玉米霜霉病是一种毁灭性病害，一旦发生很难控制。引起玉米霜霉病的病原菌包括霜指霉菌、指疫霉菌和指梗霉菌三类九种。近年该病在东南亚地区，特别是印度、印度尼西亚、菲律宾、泰国、巴基斯坦等邻邦国家已经流行，在我国也有发生。
3 检验方法
(1 )仪器设备 显微镜。
(2 )症状检验 该菌所致症状的特点是，病叶淡绿至淡黄色或苍白色，有紫色条纹和条斑，湿度高时在叶背面形成灰白色霉状物，即病菌的无性繁殖体游动孢子囊梗和游动孢子囊。以后条纹和条斑颜色逐渐加深变褐，组织坏死。幼苗染病后生长缓慢，节间缩短，植株矮化。重病株不能正常抽穗。果穗雄花畸形。各种霜霉病症状有时因病原菌种类和环境条件变化而有所不同。指疫霉菌使叶片发生斑驳、叶脉不规则增厚、花序多育、雄穗畸形呈刺猬状等所谓 “疯顶”的特别症状。
(3 )形态学检验 孢囊梗 1 根至数根，丛生，自气孔伸出，主梗 (轴)较粗壮，基部膨大，长宽径 (83～208 )μ m× (96～24 )μ m ，叉状分支 2～6 次，顶枝 (末枝)弯曲，长宽径(64～224 )μ m× (16～32 )μ m ;孢子囊卵圆形或椭圆形，大小为 (192～282 )μ m×(192～24 )μ m ，平均 25 μ m×234 μ m 。
三、马铃薯癌肿病菌
1 分类地位
马铃薯癌肿病菌属鞭毛菌亚门、壶菌纲、壶菌目、集壶菌科、集壶菌属。
2 危害性
马铃薯癌肿病菌属菌在自然条件下主要危害马铃薯。另外，此菌还能够侵染番茄、甘苦茄、龙葵、豕草属、假酸浆属、酸浆属和蜀羊属。该病主要危害块茎，对马铃薯产量和质量影响很大，发病后结薯块减少，产量降低，产量损失可达 50% 以上，甚至毁产;同时品质变劣，不能食用或种用。病块薯块也不易煮烂，并易引起储藏期烂窖。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 切片刀、显微镜、电子天平、量筒、离心机。
(2 )薯块检验 首先检查块茎上有无癌瘤，特别要注意检查芽眼组织，可将其做徒手切片，镜检有无夏孢子囊和休眠孢子囊，周围细胞是否有菊花瓣状增生。由于病组织往往有不同程度的木质化或木栓化，可加 1 滴 1% “藏花红”染色液以示区别，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。另外，也可将小块组织置于灭菌水玻片上静置 30min ，见有大量游动孢子放出，用 1%锇酸或 01% 升汞 ( HgCl2 )一滴固定游动孢子，在空气中晾干。再用 1% 碱性红或 1%～5% “甲紫液” 1 滴染色 1min ，洗去紫液后镜检，可见单鞭的游动孢子和双鞭毛的接合子。注意有些未表现症状的薯块，也可能带菌，故仅凭肉眼检查是不够可靠的。
(3 )土壤检验 氢氟酸 ( HF )萃取法是一种较好的检查土壤休眠孢子囊的方法，也可以作定量研究。具体步骤如下。
① 收集土样 收集黏附在薯块上的土壤，或采集田间土壤，经自然风干，除去粗大土块和砂粒。
② 用 HF 溶解土样中硅质物和有机质 取土壤3g，放入聚乙烯离心管中 (不能用玻璃管)，注入浓 HF (43%～51% )至半管，小心搅拌 5～7 次 ( HF 有毒，操作时要注意安全)，使土壤中的硅物质 (SiO 2 ，硅酸盐等)溶解，有机质彻底分解。
③ 离心分离 向离心管中加入蒸馏水至管口 15cm 处，再均匀搅拌一次，然后以 2500～3000r / min 离心 10～15min 。倒去上清液，再加蒸馏水至原高度，搅拌后再离心 10min ，如此重复做 4 次土壤洗涤。
④ 镜检 将沉淀底部的湿土用 10～15mL 的蒸馏水分次洗出，这时的洗液可用于镜检。这一方法也可以作定量测定。
(4 )形态学检验 该菌不形成菌丝体，是整体产果式的内生专性寄生菌，菌体可产生原始孢囊堆，并由此形成夏孢囊堆和夏孢子囊，即游动孢子囊，经游动配子的配合形成 “接合子”，进而发育为休眠孢子囊。夏孢子囊大小为 (403～77 )μ m× (314～644 )μ m ，游动孢子或配子为单核、单鞭毛，大小为 20～25μ m 。休眠孢子囊，球形或卵形，黄褐色。具厚壁，分为三层，内壁薄而无色，中壁光滑，黄金褐色，外壁厚，色较暗。具有不规则的脊突，大小不一，直径 25～75μ m 。春季萌发可产生游动孢子和休眠孢子。
四、大豆疫霉菌
1 分类地位
大豆疫霉菌属于鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、腐霉科、疫霉属大豆转化种。
2 主要危害
大豆疫霉菌的寄主专化性较强，主要侵染大豆。此外，还可以危害羽扁豆属、菜豆、豌豆、双化扁豆、红花、欧芹、甜菜、菠菜、胡萝卜、马铃薯、番茄、甘蔗、紫苜蓿、低地三叶草等。该病可侵染各生长阶段的大豆，造成种腐、苗期死亡、根瘤等症状，具有很大的危险性和毁灭性。在感病品种上，大豆疫病可造成损失 25% ～50% ，个别高感品种损失可达60%～75% 或更多。据报道，在美国依阿华州，有些低洼田块大豆疫病非常严重，以至造成全植株枯死，被害种子蛋白质含量会明显降低。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 培养皿、电子天平、显微镜、筛子。
(2 )种子检疫 检验大豆种子表面附着的病菌，可进行常规的种子洗涤检验，观察是否有疫病的卵孢子 (注意与大豆霜霉卵孢子相区别)。必要时，挑取种子中的病粒，进行分离培养。在基础培养基中可加入各种抗生素和药剂，制成选择性培养基，即在每 1000mL 基础培养基 (常用玉米粉、 V8 汁或胡萝卜、利马豆汁培养基)中，加入多维菌素 10mg 、氨苄西林 250mg 、利福平 10mg 、五氯硝基苯 100mg 、土菌消 (恶霉灵) 5mg 等。该菌的分离比较困难，主要原因是菌丝体在种子表面的存活时间较短。分离疫霉菌时，由于该菌在种子表面的存活时间较短，首先要进行人工接种，培养后测定其活性，以确定确实分离得到了活菌。测定其致病性，再作进一步鉴定。
(3 )土壤中分离病菌
① 过筛法 土壤悬浮液通过不同孔径的筛子过筛，获得疫霉菌卵孢子。
② 诱捕法 在病土中加入无菌水，搅匀后加入 PCNB 、青霉素、利富平，使其浓度达到各 50mg / L ，以抑制杂菌生长。然后将适合的诱饵，如大豆胚芽、白羽扇豆胚根等，放入其中，置适温下诱捕，发病后立即分离病菌。
(4 )病残体的检疫 将根、茎、荚、叶的病残体用乳酪油透明后，镜检卵孢子。
(5 )生物测定 将待测的病土壤、病籽粒或病残体混入灭菌土壤中，播种健康大豆种子，观察发病情况。必要时，可用上述选择性培养基，从病组织中分离病原菌，进一步鉴定。另外，应用 PCR (聚合酶链反应)方法可以对土壤中的卵孢子 DNA 直接进行检测，同时应用 DNA 测序技术加以验证。
五、烟草霜霉菌
1 分类地位
烟草霜霉菌属鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、霜霉属。
2 主要危害
烟草霜霉菌可以侵染多种烟草属植物，其中，栽培烟草受害最烈。茄子、番茄、辣椒和马铃薯也能被侵染。烟草霜霉病在苗床和田间都能发生，蔓延速度很快，可引起大量植株枯死。它是烟草的毁灭性病害，严重降低烟草的产量和品质。在病害流行年份，烟草可减产 10%～60% 。1960 年，欧洲大流行后，损失烟草 275×104t ; 1961 年意大利和北非，烟草被害率高达80% 。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 显微镜。
(2 )症状检验 幼嫩叶片发病，病叶直立;较大叶片发病初期形成黄色圆斑，随后病斑中间下陷，背面产生灰色或蓝色霉层，严重时病斑融合成褐色坏死大斑，病叶皱缩扭曲;常表现系统感染，烟株矮化凋萎;在花、蒴果上也出现病斑。
(3 )形态学检验 菌丝无隔，多核管状。无性态产生孢囊梗和孢子囊。孢囊梗树枝状，无色，长 450～750μ m ，其上生有孢子囊。孢子囊卵圆状或柠檬状，无色透明，大小 (17～28 )μ m× (13～17 )μ m 。
六、大丽轮枝菌
1 分类地位
大丽轮枝菌属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、淡色孢科、轮枝孢属。
2 主要危害
大丽轮枝菌属菌的寄主范围很广，目前，已知的寄主植物涉及十字花科、蔷薇科、豆科、茄科、唇形科、菊科、锦葵科等多达数百种，包括棉花、茄子、马铃薯、烟草、辣椒、番茄、芝麻、南瓜、甜瓜、黄瓜、蚕豆、大豆、绿豆、花生、苘麻、向日葵、甜菜、丁香、糖槭、江西腊、龙葵、酸浆、苍耳、草莓等。棉花黄萎病由大丽轮枝菌所致且危害性很大，虽不使棉花迅速枯死，但病株叶片变黄干枯，结铃减少，落铃率高，严重影响棉花产量和质量。在自然条件下，苗期很少发病，病株高峰出现在棉株生长的中后期，病株的棉铃脱落率，一般比健株明显下降。减产幅度因发病迟早和受害轻重而不同，一般可达 20%～60% 。黄萎病不仅对棉花产量影响大，而且，对棉花纤维的长度和强度也有较大影响。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 量筒、培养皿、培养箱、电子天平。
(2 )形态学检验 大丽轮枝菌的菌落初为白色，在培养基上培养，随后形成大量黑色微菌核，菌落变为黑色。菌丝体初为无色，逐渐变粗而后细胞壁加厚呈黑褐色，许多厚壁细胞集结成褐色微菌核。分生孢子梗轮状分支，梗长 110～130μ m ，分支大小为 (137～214 )μ m× (23～27 )μ m 。分生孢子无色，单胞，长卵圆形，大小为 (23～91 )μ m×(15～30 )μ m 。
一、小麦矮腥黑穗菌
1 分类地位
小麦矮腥黑穗菌属担子菌亚门、冬孢菌纲、黑粉菌目、黑粉菌科、腥黑粉菌属、麦矮化腥黑穗菌种。
2 主要危害
小麦矮腥黑穗菌主要危害小麦，也侵染大麦、黑麦、冰草等禾本科约 15 个属植物 (包括小麦属、大麦属、燕麦属、黑麦属、山羊草属、冰草属、野麦属、绒草属、毒麦属、雀麦草属、鸭茅属、早熟禾属、三毛草属、剪股颖属、看麦娘属)。小麦矮腥黑穗病是麦类黑穗病中危害最大、最难防治的一种病害，病菌冬孢子在土壤中长期存活 (6～7 年，甚至 10 年)，随土壤传播，一旦传入，难以根除。小麦感染后，一般减产 20%～50% ，某些感病品种可减产 50% 以上，甚至达 90% 。同时，还会影响小麦面粉质量，含孢子过多的面粉有鱼腥味 (含三甲胺)而不宜食用。 1972 年，美国西部7 个州发病面积达 241 万公顷，平均减产 17% ，损失小麦 12 亿多千克。该病系花器侵染的局部性病害，病穗不是所有籽粒都受感染，病粒也不是整个都受破坏。侵染从种脐开始延至腹沟，在表皮下形成黑粉，可侵染到胚乳，但不破坏胚，发病种子仍然萌发。病轻麦粒仅部分受侵染，但形成明显的黑斑。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 筛子、显微镜、离心机、培养皿等。
(2 )形态学检验 冬孢子呈球形或近似球形，黄褐色或褐色，大小为 10～15 μ m ，孢子外壁有刺状突起，网脊尖而长，网目大小为 3～6μ m ，高 1.5～3 μ m ，胶质鞘厚度为 1.5～5.5 μ m ，具有腥味。
(3 )症状和洗涤检查
① 取样及病征检查 样品过筛后，仔细检查有无黑粉病粒及其碎片，可疑者镜检。
② 洗涤检查 步骤如下。
样品加无菌水，振荡 5min 以上，离心 1000r / min ， 5～10min ;沉淀加入几滴席尔液;制片镜检 (每一样品至少 5 片);孢子测量：根据孢子大小、网目高度、网脊高度、网鞘厚度进行判断。如 70% 以上的孢子网脊在 1.5～2.5μ m ，胶质鞘厚度 2～3 μ m ，可鉴定为矮腥黑穗菌，而网腥黑穗菌的上述两参数都小于 1.2μ m 。
(4 )冬孢子显微电泳法 矮腥冬孢子囊由多糖蛋白质和脂类等物质构成，其上带有正电荷，它与网腥冬孢子囊不同。在显微镜下观测，它们在电场中的移动速度也不一致，由此可加以区分。见表 51 。
(5 )冬孢子网脊自发荧光率法 利用矮腥冬孢子网脊自发荧光率高于其他黑粉菌的特性，结合形态特征进行鉴定。
(6 )孢子萌发检验 冬孢子在 3% 水洋菜培养基 ( WA 培养基)上，置于 5℃ 光照培养。一周左右萌发者为网腥冬孢子， 20 天到 3 个月开始萌发者为矮腥冬孢子。网腥冬孢子和矮腥冬孢子的萌芽特征如下。
① 网腥冬孢子：先菌丝较少，有分支，担孢子 (小孢子)一般为 4～16 个;
② 矮腥冬孢子：先菌丝有分支，担孢子数量多，可达 50～60 个。
(7 )其他鉴别新方法 主要包括：冬孢子水解作用;凝集反应;高碘酸消解细胞壁;冬孢子胶鞘负染;冬孢子变形试验，以此来鉴别矮腥黑穗菌和网腥黑穗菌。上述方法中，高碘酸消解细胞壁和冬孢子胶鞘负染法较为简单方便，但由于各地的冬孢子有所不同，有时易与孢子混淆，故最有效、正确的鉴别方法是利用孢子萌芽，其缺点是需时间较长。
二、玉米霜霉菌
1 分类地位
玉米霜霉菌属鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、霜霉科。
2 危害性
玉米霜霉病是一种毁灭性病害，一旦发生很难控制。引起玉米霜霉病的病原菌包括霜指霉菌、指疫霉菌和指梗霉菌三类九种。近年该病在东南亚地区，特别是印度、印度尼西亚、菲律宾、泰国、巴基斯坦等邻邦国家已经流行，在我国也有发生。
3 检验方法
(1 )仪器设备 显微镜。
(2 )症状检验 该菌所致症状的特点是，病叶淡绿至淡黄色或苍白色，有紫色条纹和条斑，湿度高时在叶背面形成灰白色霉状物，即病菌的无性繁殖体游动孢子囊梗和游动孢子囊。以后条纹和条斑颜色逐渐加深变褐，组织坏死。幼苗染病后生长缓慢，节间缩短，植株矮化。重病株不能正常抽穗。果穗雄花畸形。各种霜霉病症状有时因病原菌种类和环境条件变化而有所不同。指疫霉菌使叶片发生斑驳、叶脉不规则增厚、花序多育、雄穗畸形呈刺猬状等所谓 “疯顶”的特别症状。
(3 )形态学检验 孢囊梗 1 根至数根，丛生，自气孔伸出，主梗 (轴)较粗壮，基部膨大，长宽径 (83～208 )μ m× (96～24 )μ m ，叉状分支 2～6 次，顶枝 (末枝)弯曲，长宽径(64～224 )μ m× (16～32 )μ m ;孢子囊卵圆形或椭圆形，大小为 (192～282 )μ m×(192～24 )μ m ，平均 25 μ m×234 μ m 。
三、马铃薯癌肿病菌
1 分类地位
马铃薯癌肿病菌属鞭毛菌亚门、壶菌纲、壶菌目、集壶菌科、集壶菌属。
2 危害性
马铃薯癌肿病菌属菌在自然条件下主要危害马铃薯。另外，此菌还能够侵染番茄、甘苦茄、龙葵、豕草属、假酸浆属、酸浆属和蜀羊属。该病主要危害块茎，对马铃薯产量和质量影响很大，发病后结薯块减少，产量降低，产量损失可达 50% 以上，甚至毁产;同时品质变劣，不能食用或种用。病块薯块也不易煮烂，并易引起储藏期烂窖。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 切片刀、显微镜、电子天平、量筒、离心机。
(2 )薯块检验 首先检查块茎上有无癌瘤，特别要注意检查芽眼组织，可将其做徒手切片，镜检有无夏孢子囊和休眠孢子囊，周围细胞是否有菊花瓣状增生。由于病组织往往有不同程度的木质化或木栓化，可加 1 滴 1% “藏花红”染色液以示区别，健康组织细胞壁呈亮红色，感病组织细胞壁呈暗红色。另外，也可将小块组织置于灭菌水玻片上静置 30min ，见有大量游动孢子放出，用 1%锇酸或 01% 升汞 ( HgCl2 )一滴固定游动孢子，在空气中晾干。再用 1% 碱性红或 1%～5% “甲紫液” 1 滴染色 1min ，洗去紫液后镜检，可见单鞭的游动孢子和双鞭毛的接合子。注意有些未表现症状的薯块，也可能带菌，故仅凭肉眼检查是不够可靠的。
(3 )土壤检验 氢氟酸 ( HF )萃取法是一种较好的检查土壤休眠孢子囊的方法，也可以作定量研究。具体步骤如下。
① 收集土样 收集黏附在薯块上的土壤，或采集田间土壤，经自然风干，除去粗大土块和砂粒。
② 用 HF 溶解土样中硅质物和有机质 取土壤3g，放入聚乙烯离心管中 (不能用玻璃管)，注入浓 HF (43%～51% )至半管，小心搅拌 5～7 次 ( HF 有毒，操作时要注意安全)，使土壤中的硅物质 (SiO 2 ，硅酸盐等)溶解，有机质彻底分解。
③ 离心分离 向离心管中加入蒸馏水至管口 15cm 处，再均匀搅拌一次，然后以 2500～3000r / min 离心 10～15min 。倒去上清液，再加蒸馏水至原高度，搅拌后再离心 10min ，如此重复做 4 次土壤洗涤。
④ 镜检 将沉淀底部的湿土用 10～15mL 的蒸馏水分次洗出，这时的洗液可用于镜检。这一方法也可以作定量测定。
(4 )形态学检验 该菌不形成菌丝体，是整体产果式的内生专性寄生菌，菌体可产生原始孢囊堆，并由此形成夏孢囊堆和夏孢子囊，即游动孢子囊，经游动配子的配合形成 “接合子”，进而发育为休眠孢子囊。夏孢子囊大小为 (403～77 )μ m× (314～644 )μ m ，游动孢子或配子为单核、单鞭毛，大小为 20～25μ m 。休眠孢子囊，球形或卵形，黄褐色。具厚壁，分为三层，内壁薄而无色，中壁光滑，黄金褐色，外壁厚，色较暗。具有不规则的脊突，大小不一，直径 25～75μ m 。春季萌发可产生游动孢子和休眠孢子。
四、大豆疫霉菌
1 分类地位
大豆疫霉菌属于鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、腐霉科、疫霉属大豆转化种。
2 主要危害
大豆疫霉菌的寄主专化性较强，主要侵染大豆。此外，还可以危害羽扁豆属、菜豆、豌豆、双化扁豆、红花、欧芹、甜菜、菠菜、胡萝卜、马铃薯、番茄、甘蔗、紫苜蓿、低地三叶草等。该病可侵染各生长阶段的大豆，造成种腐、苗期死亡、根瘤等症状，具有很大的危险性和毁灭性。在感病品种上，大豆疫病可造成损失 25% ～50% ，个别高感品种损失可达60%～75% 或更多。据报道，在美国依阿华州，有些低洼田块大豆疫病非常严重，以至造成全植株枯死，被害种子蛋白质含量会明显降低。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 培养皿、电子天平、显微镜、筛子。
(2 )种子检疫 检验大豆种子表面附着的病菌，可进行常规的种子洗涤检验，观察是否有疫病的卵孢子 (注意与大豆霜霉卵孢子相区别)。必要时，挑取种子中的病粒，进行分离培养。在基础培养基中可加入各种抗生素和药剂，制成选择性培养基，即在每 1000mL 基础培养基 (常用玉米粉、 V8 汁或胡萝卜、利马豆汁培养基)中，加入多维菌素 10mg 、氨苄西林 250mg 、利福平 10mg 、五氯硝基苯 100mg 、土菌消 (恶霉灵) 5mg 等。该菌的分离比较困难，主要原因是菌丝体在种子表面的存活时间较短。分离疫霉菌时，由于该菌在种子表面的存活时间较短，首先要进行人工接种，培养后测定其活性，以确定确实分离得到了活菌。测定其致病性，再作进一步鉴定。
(3 )土壤中分离病菌
① 过筛法 土壤悬浮液通过不同孔径的筛子过筛，获得疫霉菌卵孢子。
② 诱捕法 在病土中加入无菌水，搅匀后加入 PCNB 、青霉素、利富平，使其浓度达到各 50mg / L ，以抑制杂菌生长。然后将适合的诱饵，如大豆胚芽、白羽扇豆胚根等，放入其中，置适温下诱捕，发病后立即分离病菌。
(4 )病残体的检疫 将根、茎、荚、叶的病残体用乳酪油透明后，镜检卵孢子。
(5 )生物测定 将待测的病土壤、病籽粒或病残体混入灭菌土壤中，播种健康大豆种子，观察发病情况。必要时，可用上述选择性培养基，从病组织中分离病原菌，进一步鉴定。另外，应用 PCR (聚合酶链反应)方法可以对土壤中的卵孢子 DNA 直接进行检测，同时应用 DNA 测序技术加以验证。
五、烟草霜霉菌
1 分类地位
烟草霜霉菌属鞭毛菌亚门、卵菌纲、霜霉目、霜霉属。
2 主要危害
烟草霜霉菌可以侵染多种烟草属植物，其中，栽培烟草受害最烈。茄子、番茄、辣椒和马铃薯也能被侵染。烟草霜霉病在苗床和田间都能发生，蔓延速度很快，可引起大量植株枯死。它是烟草的毁灭性病害，严重降低烟草的产量和品质。在病害流行年份，烟草可减产 10%～60% 。1960 年，欧洲大流行后，损失烟草 275×104t ; 1961 年意大利和北非，烟草被害率高达80% 。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 显微镜。
(2 )症状检验 幼嫩叶片发病，病叶直立;较大叶片发病初期形成黄色圆斑，随后病斑中间下陷，背面产生灰色或蓝色霉层，严重时病斑融合成褐色坏死大斑，病叶皱缩扭曲;常表现系统感染，烟株矮化凋萎;在花、蒴果上也出现病斑。
(3 )形态学检验 菌丝无隔，多核管状。无性态产生孢囊梗和孢子囊。孢囊梗树枝状，无色，长 450～750μ m ，其上生有孢子囊。孢子囊卵圆状或柠檬状，无色透明，大小 (17～28 )μ m× (13～17 )μ m 。
六、大丽轮枝菌
1 分类地位
大丽轮枝菌属半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、淡色孢科、轮枝孢属。
2 主要危害
大丽轮枝菌属菌的寄主范围很广，目前，已知的寄主植物涉及十字花科、蔷薇科、豆科、茄科、唇形科、菊科、锦葵科等多达数百种，包括棉花、茄子、马铃薯、烟草、辣椒、番茄、芝麻、南瓜、甜瓜、黄瓜、蚕豆、大豆、绿豆、花生、苘麻、向日葵、甜菜、丁香、糖槭、江西腊、龙葵、酸浆、苍耳、草莓等。棉花黄萎病由大丽轮枝菌所致且危害性很大，虽不使棉花迅速枯死，但病株叶片变黄干枯，结铃减少，落铃率高，严重影响棉花产量和质量。在自然条件下，苗期很少发病，病株高峰出现在棉株生长的中后期，病株的棉铃脱落率，一般比健株明显下降。减产幅度因发病迟早和受害轻重而不同，一般可达 20%～60% 。黄萎病不仅对棉花产量影响大，而且，对棉花纤维的长度和强度也有较大影响。
3 检验方法
(1 )主要仪器设备 量筒、培养皿、培养箱、电子天平。
(2 )形态学检验 大丽轮枝菌的菌落初为白色，在培养基上培养，随后形成大量黑色微菌核，菌落变为黑色。菌丝体初为无色，逐渐变粗而后细胞壁加厚呈黑褐色，许多厚壁细胞集结成褐色微菌核。分生孢子梗轮状分支，梗长 110～130μ m ，分支大小为 (137～214 )μ m× (23～27 )μ m 。分生孢子无色，单胞，长卵圆形，大小为 (23～91 )μ m×(15～30 )μ m 。
