食品微生物培养基制作和注意事项
1、培养基的分类
据组成成分可分为:
1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
按用途可分为
1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求
加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离
3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离
4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
2、培养基的配制
(1)称量
按培养基的配方准确称取各成分，其中牛肉膏放在小烧杯里称量，其他成分放在称量纸上称量。
(2)溶化
用烧杯先装少许水,依次将药品倒入铝锅中，加足水，然后在电炉上加热溶化。
(3)PH值
用精密的PH试纸测定，并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的PH值。
(4)过滤
趁热用纱布将培养基进行过滤。
(5)分装
过滤后根据不同需要，立即趁热装入试管或三角瓶等容器中。
微生物培养基培养的注意事项
(1)不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。
(2)液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。
(3)固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。
(4)半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。
(6)做棉塞
装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下：
(1)用脱脂棉制作(脱脂棉花易吸水)
(2)松紧适合
(3)塞头不要太大，一般为球状。
(7)包装
试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。
(8)灭菌
灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。
灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。
物理灭菌：1、热力灭菌：
2、紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。
•干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。
•火焰灭菌：适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。
•湿热灭菌：
•(1)高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。
•(2)间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。
•(3)巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。
紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌
高压蒸汽灭菌
•高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。
•分类：1、卧式 2、立式
•具体操作步骤：
•(1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)
•(2)摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。
•(3)加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋)
•(4)打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽)关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时(15磅/时2)控制热源维持所需时间(30分钟)然后停止加热，让其自然冷却。
•(5)待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。
•注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。
•(6)自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用。
• 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。
据组成成分可分为:
1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。
2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。
3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
按用途可分为
1.基础培养基：能满足各种微生物的营养需求
加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离
3.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离
4.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。
2、培养基的配制
(1)称量
按培养基的配方准确称取各成分，其中牛肉膏放在小烧杯里称量，其他成分放在称量纸上称量。
(2)溶化
用烧杯先装少许水,依次将药品倒入铝锅中，加足水，然后在电炉上加热溶化。
(3)PH值
用精密的PH试纸测定，并用1%氧化钠或5%盐酸调节到所需的PH值。
(4)过滤
趁热用纱布将培养基进行过滤。
(5)分装
过滤后根据不同需要，立即趁热装入试管或三角瓶等容器中。
微生物培养基培养的注意事项
(1)不要使培养基沾在管口，如沾上，需用干净的纱布擦干净。
(2)液体培养基：分装高度以试管的1/4左右为宜。
(3)固体培养基：分装试管，其装量为管高的1/6~1/5灭菌后制成斜面。分装三角瓶容量之一半为宜。
(4)半固体培养基：分装试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后，垂直待凝成半固体深层琼脂。
(6)做棉塞
装好培养基的试管都要加上棉塞，这样既可过滤空气，避免杂菌侵入，又可减缓培养基水分的蒸发，制棉塞的方法多种，形状各异，总原则如下：
(1)用脱脂棉制作(脱脂棉花易吸水)
(2)松紧适合
(3)塞头不要太大，一般为球状。
(7)包装
试管口或三角瓶口棉塞部分，用牛皮纸扎，以防灭菌时水蒸气打湿棉塞。
(8)灭菌
灭菌是指杀死物品上或环境中的所有微生物。
灭菌方法可分为四种：物理灭菌、机械灭菌、化学灭菌和生物灭菌。
物理灭菌：1、热力灭菌：
2、紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌。
•干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。
•火焰灭菌：适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。
•湿热灭菌：
•(1)高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。
•(2)间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。
•(3)巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。
紫外光灭菌：一般应用于无菌室和接种箱的灭菌
高压蒸汽灭菌
•高压蒸汽灭菌锅是一个耐高压又密闭的金属锅。它是利用在密闭条件下产生高压蒸汽来达到灭菌的效果。其温度在100oC以上，有强大的杀菌能力。因此它是一种用途广泛，效率高的灭菌工具。
•分类：1、卧式 2、立式
•具体操作步骤：
•(1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)
•(2)摆入上述包装好的待灭菌的培养基，注意：不要摆得太挤，以免影响蒸汽流通和灭菌效果。
•(3)加盖旋紧螺旋，使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋)
•(4)打开放气阀，打开电源，自开始产生蒸汽后10分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽)关紧放气阀，让温度随蒸汽压力上升而上升，当达所需压力时(15磅/时2)控制热源维持所需时间(30分钟)然后停止加热，让其自然冷却。
•(5)待压力降至0磅时，打开排气阀，再打开锅盖，取出灭菌物。
•注意：压力未降至0磅时，切勿打开锅盖，否则突然降压，招致培养基沸腾，沾湿棉塞，甚至冲出管外。
•(6)自锅中取出灭菌好的培养基，放置稍冷却后摆成斜面，而后至37oC恒温箱培养24小时，无菌生长，方可保存备用。
• 应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前，必须将锅内的冷空气完全排尽，否则虽然压力表已指15磅/时，但锅内的温度还只有100oC，结果往往造成灭菌不彻底。
