【实验原理】

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应X 所以用愈酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用意酮法可以一次测出总量。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与意酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行比色。

【操作步骤】

1. 称量：用台式天平称取0.10g玉米淀粉，置于50mL锥形瓶中。

2. 样品制备：加入30ml沸水于锥形瓶中，沸水浴30min(不时摇动)，取出，3000rpm离心10min，反复洗涤残渣2次，合并滤液，冷却至室温，定容到50ml容量瓶中，再从中取出1.5ml，再定容到25ml的容量瓶中

3. 标准曲线的制备：

①吸标样：吸取0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.6，0.8ml葡萄糖标准使用液(相当于0，10，20，30，40，60，80µg葡萄糖)，分别置于10m1带塞比色管中。

②加蒸馏水：吸取1.0，0.9，0.8，0.7，0.6，0.4，0.2ml蒸馏水分别加入加有0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.6，0.8ml葡萄糖标准使用液的试管中

③加蒽酮试剂：于各试管中分别加入4.0m1蒽酮试剂，置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，。

④定容比色：冷却后于波长620nm处比色测量各管OD值

⑤绘制标准曲线：用葡萄糖含量和吸光值绘图。

4. 样品测定：吸取1.0m1样品制备液(25ml的容量瓶中)于10ml带塞比色管中，加入4.0ml蒽酮试剂，置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。以标准曲线中的1号试管作为空白.