食品微生物检验技术（大肠杆菌）
1.菌落总数
2.大肠菌群
3.霉菌和酵母菌
4.金黄色葡萄球菌
5.沙门氏菌
2.大肠菌群 GB 4789.3-2010
2.1 定义
大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2意义
2.2.1大肠菌群是人和动物肠道中的正常微生物区系，并且只存在于人和动物肠道中。通常与动物肠道病原菌同时存在，只是数量不同。
2.2.2动物肠道病原菌抵抗外界不良环境的能力较差，在体外环境中极易死亡，所以难以在食品中检出。
基于上述原因，通常采用大肠菌群来预测食品被粪便、肠道病原菌污染的可能性。
3.实验试剂与耗材
LST培养基，BGLB培养基，试管，小套管，生理盐水等。
4.检验程序
见下图
5.操作步骤
5.1 样品稀释
5.1.1固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。
5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。
5.1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5～7.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。
5.1.4 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
5.1.5 按 5.1.4 操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过 15 min。
5.2 初发酵试验
每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤)，36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
5.3 复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环， 移种于煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB)管中， 36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
6 大肠菌群最可能数(MPN)的报告
按5.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。
2.大肠菌群
3.霉菌和酵母菌
4.金黄色葡萄球菌
5.沙门氏菌
2.大肠菌群 GB 4789.3-2010
2.1 定义
大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37 ℃、24 h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
2.2意义
2.2.1大肠菌群是人和动物肠道中的正常微生物区系，并且只存在于人和动物肠道中。通常与动物肠道病原菌同时存在，只是数量不同。
2.2.2动物肠道病原菌抵抗外界不良环境的能力较差，在体外环境中极易死亡，所以难以在食品中检出。
基于上述原因，通常采用大肠菌群来预测食品被粪便、肠道病原菌污染的可能性。
3.实验试剂与耗材
LST培养基，BGLB培养基，试管，小套管，生理盐水等。
4.检验程序
见下图
5.操作步骤
5.1 样品稀释
5.1.1固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。
5.1.2液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。
5.1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5～7.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。
5.1.4 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。
5.1.5 按 5.1.4 操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过 15 min。
5.2 初发酵试验
每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液)，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤，每管接种1mL(如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤)，36℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。
5.3 复发酵试验
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环， 移种于煌绿乳糖胆盐肉汤 (BGLB)管中， 36 ℃±1℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
6 大肠菌群最可能数(MPN)的报告
按5.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。
