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细菌革兰氏染色

 一、目的

了解细菌革兰氏染色原理,并掌握其方法。

二、原理

革兰氏染色法是一种重要的鉴别细菌的方法,根据各种细菌对这种染色法的反应不同,可把细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两大类。因此,该方法对于细菌的分类,鉴定及生产应用都有重要意义。其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同,革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚,交联而成的肽聚糖网状结构致密,经乙醇脱色处理发生脱水作用,使孔径缩小,通透性能降低,结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色,结果使细胞呈现紫色;而革兰氐阴性菌肽聚糖层薄,网状结构交联少,脂类含量较高,经乙醇处理后,脂类被溶解,细胞壁孔径变大,通透性增加,结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁,使细胞脱色。此时,再经复红或沙黄等红色染料复染细胞呈红色。

在革兰氏染色中,有两个值得注意的问题。一是酒精脱色的时间要掌握恰当,随涂片
厚薄不同,脱色的时间也不完全一样,一般以不溶出色素为止。若脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌,而脱色不够时阴性菌则被误染为阳性菌。二是培养物的老幼对染色结果也有影响,革兰氏染色检查的菌,必须是新培养物。

三、材料

1.菌种 培养10~12h的枯草杆菌及大肠杆菌。

2.仪器及其他 显微镜、接种环、酒精灯、载玻片、玻片架、75%酒精消毒缸、镊子、无菌水、草酸铵结晶紫、Lugol氏碘液、95%洒精、蕃红染液、吸水纸、特种蜡笔。

四、方法与步骤

1.涂片 涂片、干燥、固定同简单染色法。

2.初染 滴加草酸铵结晶紫于涂片部位,染色时间为1min。
3.水洗 用水轻轻冲洗,洗去多余的染料。
4.滴加Lugol氏碘液1~2min,紫色部分变黑为止。
5.水洗 倾去Lugol氏碘液水洗。

6.脱色 滴加95%以上的酒精,约30〜60s (色素不溶出为止)。
7.水洗 同5水洗。

8.复染 滴加蕃红或沙黄染1~2min。
9.水洗 同5水洗。

10.干燥 自然干燥或用吸水纸吸干。

11.镜检 用油镜观察,记录结果。

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